MS培养基的配制包括以下步骤。
培养基母液的配制和保存 MS培养基含有近30种营养成分,为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量,可将培养基中的各种成分,按原量的20倍或200倍分别称量,配成浓缩液,这种浓缩液叫做培养基母液。这样每次使用时,取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL),加水稀释,制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出,供配制时使用。
大量元素(母液Ⅰ) mg/L
NH4NO3 33 000
KNO3 38 000
CaCl2·2H2O 8 800
MgSO4·7H2O 7 400
KH2PO4 3 400
微量元素(母液Ⅱ)
KI 166
H3BO3 1 240
MnSO4·4H2O 4 460
ZnSO4·7H2O 1 720
Na2MoO4·2H2O 50
CuSO4·5H2O 5
CoCl2·6H2O 5
铁盐(母液Ⅲ)
FeSO4·7H2O 5 560
Na2-EDTA·2H2O 7 460
有机成分(母液Ⅳ)
ⅣA
肌醇 20 000
ⅣB
烟酸 100
盐酸吡哆醇(维生素B6) 100
盐酸硫胺素(维生素B1) 100
甘氨酸 400
以上各种营养成分的用量,除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外,其余的均为200倍浓缩液。
上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。其中,母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是:每种母液中的几种成分称量完毕后,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,然后再将它们混溶,很后定容到1 L。
母液Ⅲ的配制方法是:将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将pH调至5.5,很后定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中。
各种母液配完后,分别用玻璃瓶贮存,并且贴上标签,注明母液号、配制倍数、日期等,保存在冰箱的冷藏室中。
MS培养基中还需要加入2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、萘乙酸(NAA)、6-苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质,并且分别配成母液(0.1 mg/mL)。其配制方法是:分别称取这3种物质各10 mg,将2,4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶,将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解,溶解过程需要水浴加热,很后分别定容至100 mL,即得质量浓度为0.1 mg/mL的母液。
配制培养液 用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量:母液Ⅰ为50 mL,母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB各5 mL。再取2,4-D 5 mL、NAA 1 mL,与各种母液一起放入烧杯中。
配制培养液时应注意:①在使用提前配制的母液时,应在量取各种母液之前,轻轻摇动盛放母液的瓶子,如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染,应立即淘汰这种母液,重新进行配制;②用量筒或移液管量取培养基母液之前,必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次;③量取母液时,很好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上,量取1种,划掉1种,以免出错。
溶化琼脂 用粗天平分别称取琼脂9 g、蒸糖30 g,放入1 000 mL的搪瓷量杯中,再加入蒸馏水750 mL,用电炉加热,边加热边用玻璃棒搅拌,直到液体呈半透明状。然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中,很后加蒸馏水定容至1 000 mL,搅拌均匀。
调pH 用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH溶液,逐滴滴入溶化的培养基中,边滴边搅拌,并随时用精密的pH试纸(5.4~7.0)测培养基的pH,一直到培养基的pH为5.8为止(培养基的pH必须严格控制在5.8)。
植物的组织培养基怎么做?一般来说,植物培养使用固体培养基,所以里面需要加入琼脂,一般每升加入6到8克琼脂粉即可(培养基pH会影响琼脂凝固效果,低了不易凝固,高了则过硬,一般在5-8之前问题不是太大)。此外,培养基中需要加入碳源,一般使用蔗糖或者葡萄糖。很后,植物培养基中还需要无机物,比如钙离子,钾离子等等,也有的培养基中需要加入维生素和肌醇等物质。当然,不同的植物以及不同的培养目的使用的培养基是不同的。
植物培养基
不用土壤,而改用其他物质代替土壤,做为培养基进行农作物种植,叫无土栽培。虽不用土壤,同样可以培养出农作物来。它有保水、保肥,便于操作等优点,没有泥污和土壤过重的缺点,所以为人们当前所乐用。无土栽培方式很多,但多数配方比较繁琐,原材料难以凑齐。下面介绍两种简单易行的无土栽培材料。
锯末培养基 用70%的锯末和30%的家禽粪,或破碎的饼肥,混合均匀堆积,加些人粪尿,经充分发酵后,即可用来种农作物。若再加些煤球灰,则透气渗水性能更好。
蛭石培养基 蛭石是一种质地轻松的矿物质,工业上用做保温材料。用蛭石与发酵后的马粪按4∶1的比例混和拌匀,即可用做培养基。马粪是酸性的,所以适合培育南方喜酸性土的农作物。
这两种培养基都很疏松,既透气又渗水,不会板结,保水、保肥力也强,有利花木生根发育。移栽倒盆时,易于操作,不会伤根。因质量轻,原材料不难取得,很适合种农作物。
植物种植培养基的做法是怎么样的培养基中取苗剪成小段种植叫植物组织培养植物的组织培养是根据植物细胞具有全能性这个理论,原生质体等,通过无菌操作,近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术。植物的组织培养广义又叫离体培养,如形成层,在无菌条件下接种在含有各种营养物质及植物激素的培养基上进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术,指从植物体分离出符合需要的组织、薄壁组织、器官或细胞,愈伤组织再经过再分化形成再生植物。狭义是指组培指用植物各部分组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株,也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养
如何制作植物(试管苗)培养基常用25种培养基一、牛肉膏蛋白胨培养基(培养细菌用) 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂 15—20g 水 1000ml pH 7.0—7.2 1.05kg/cm2 ,121.3℃灭菌20分钟。 二、淀粉琼脂培养基(高氏1号培养基,培养放线菌用) 可溶性淀粉 20g KNO3 1g NaCl 0.5g K2 HPO4 0.5g MgSO4 0.5g FeSO4 0.01g 琼脂 20g 水 1000ml pH 7.2—7.4 配制时,先用少量冷水,将淀粉调成糊状,在火上加热,边搅拌边加水及其他成分,溶化后,补足水分至1000ml。1.05kg/cm2 ,121.3℃灭菌20分钟。 三、查氏培养基(培养霉菌用,实验16) NaNO3 2g K2 HPO4 1g KCl 0.5g MgSO4 0.5g FeSO4 0.01g 蔗糖 30g 琼脂 15—20g 水 1000ml pH 自然 1.05kg/cm2 ,121.3℃灭菌20分钟。 四、马丁氏(Martin)琼脂培养基(分离真菌用) 葡萄糖 10g 蛋白胨 5g KH2 PO4 1g MgSO4 ·7H2 O 0.5g 1/3000孟加拉红(rose bengal,玫瑰红水溶液) 100ml 琼脂 15—20g pH 自然 蒸馏水 800ml 0.56kg/cm2 (8磅/英寸2 ),112.6℃灭菌30分钟。 临用前加入0.03%链霉素稀释液100ml,使每毫升培养基中含链霉素30μg。 五、马铃薯培养基 (实验16) 马铃薯 200g 蔗糖(或葡萄糖) 20g 琼脂 15—20g 水 1000ml pH 自然 马铃薯去皮,切成块煮沸半小时,然后用纱布过滤,再加糖及琼脂,溶化后补足水至1000ml。1.05kg/cm2 ,121.3℃灭菌20分钟。
常用的植物培养基有哪些?怎样配置植物培养基植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。MS培养基的配制包括以下步骤。
培养基母液的配制和保存
MS培养基含有近30种营养成分,为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量,可将培养基中的各种成分,按原量的20倍或200倍分别称量,配成浓缩液,这种浓缩液叫做培养基母液。这样每次使用时,取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL),加水稀释,制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出,供配制时使用。
mg/L工作液浓度 单位
大量元素:
NH4NO3 1650
KNO3 1900
CaCl2·2H2O 440
MgSO4·7H2O 370
KH2PO4 170
微量元素:
KI 0.83
H3BO3 6.2
MnSO4·4H2O 22.3
ZnSO4·7H2O 8.6
Na2MoO4·2H2O 0.25
CuSO4·5H2O 0.025
CoCl2·6H2O 0.025
铁盐:
FeSO4·7H2O(27.8)
Na2-EDTA·2H2O(37.3)
有机物质:肌醇100
烟酸0.5
盐酸吡哆醇(维生素B6) 0.5
盐酸硫胺素(维生素B1) 0.1
甘氨酸2.0
注意:肌醇一般是要另外分开来独自配成浓缩液,因为它比较难溶,一般配成100倍,大量元素可以配成1000倍的。